Для комплексной оценки состояния организма (в частности его защитных функций) назначается иммуноферментный анализ крови (ИФА). ИФА анализ крови выполняется для диагностики инфекционных, аутоиммунных, гематологических патологий, первичных и вторичных иммунодефицитов. В данной статье предлагаем рассмотреть более подробно, что являет собой анализ крови методом ИФА, а также какие существуют показания для его проведения.

Показания к назначению анализа крови методом ИФА и принцип его действия

Как мы уже отметили, анализ крови методом ИФА - это лабораторное исследование, посредством которого определяются антигены или антитела в пробе крови. Данный анализ применяется для выявления уровня гормонов, иммунологических комплексов и иммуноглобулинов. Существуют следующие показания для сдачи ИФА анализа:

• Диагностирование аллергий.
• Диагностирование болезней вирусного происхождения – Эпштейн-Барр вирус, герпес, гепатиты, цитомегаловирус.
• Диагностика инфекций, передающихся половым путем – микоплазма, уреаплазма, сифилис, трихомонада, хламидиоз.
• Определение иммунодефицита.
• Диагностика онкологических патологий.
• Оценка эффективности терапии.
• Определение уровня гормонов.
• Предоперационное комплексное обследование.

Принцип действия иммуноферментного анализа крови основан на исследовании крови на наличие иммуноглобулинов (специфических белков-антител). Иммуноглобулины вырабатываются иммунитетом при попадании в организм человека антигенов (чужеродных микроорганизмов). Эти иммунные молекулы связываются с различными инфекционными возбудителями и нейтрализуют их. Важной отличительной чертой, которой обладают иммуноглобулины, является их специфичность. Благодаря таким характеристикам они могут образовывать комплекс антиген-антитело, связываясь с определенным антигеном. Во время выполнения анализа крови ИФА именно этот комплекс определяют количественно и качественно.

Для проведения данного исследования зачастую используют кровь человека. Однако в качестве материала для анализа можно брать содержимое стекловидного тела, околоплодные воды, спинномозговую жидкость. Проба крови, как правило, берется из локтевой вены пациента. Кровь рекомендуется сдавать натощак (должно пройти не менее 12 часов со времени последнего приема пищи). Если пациент принимает лекарственные средства необходимо сообщить врачу, поскольку некоторые из них могут повлиять на результат анализа. Также на достоверность результатов анализов влияет прием наркотиков и алкоголя.

Расшифровка анализа крови на ИФА

В бланке данного анализа обычно указывается отрицательный (-) или положительный (+) результат вычисления каждого класса иммуноглобулинов.

Предлагаем рассмотреть интерпретацию вероятной расшифровки анализа крови на ИФА.

• IgG, IgA не определяются и результат IgM отрицательный – полное выздоровление.
• Результат IgM, IgA, IgG отрицательный – иммунитет к инфекции отсутствует.
• Результат IgG, IgA положительный и отрицательный, а также результат IgM положительный – наличие острой инфекции.
• Положительный результат IgG и отрицательный результат IgA и IgM –поствакцинальный или постинфекционный иммунитет.
• Положительный или отрицательный результат IgG, IgA и отрицательный результат IgM – хроническая инфекция.
• Результат IgG, IgM, IgA положительный – обострение хронической инфекционной патологии.

В иммуноферментном анализе крови кроме уточнения классов антител в расшифровке указываются количественные их показатели. Однако обширное их объяснение предоставляет только лечащий доктор.

Достоинства и недостатки данного исследования

• Относительно небольшая стоимость.
• Удобство в работе.
• Возможность проведения диагностики на ранней стадии предполагаемого заболевания.
• Относительно высокая точность полученных данных.
• Небольшой промежуток времени, требуемый для получения результата исследования.
• Возможность отслеживания динамики развития инфекционного процесса в организме.
• Высокий уровень унификации, благодаря чему возможно проведение массовых обследований.
• Автоматизация всех этапов исследования.

Недостатком ИФА анализа крови является то, что он может в достаточно редких случаях давать ложноположительные или ложноотрицательные результаты. Также при проведении исследования помимо технических ошибок, причиной ложных результатов у пациента может послужить ревматоидный фактор, наличие у него хронических заболеваний (при которых вырабатываются антитела), прием некоторых лекарственных медицинских препаратов, нарушения обмена веществ.

• Лямблиоз.
• Аскаридоз.
• Цистицеркоз.
• Амебиаз.
• Трихинеллез – исследование проводят не один раз, на 4–12 неделе после инфицирования определяется максимальный уровень антител.
• Тениоз.
• Описторхоз – выполняют дифференциальную диагностику между острой и хронической формой болезни.
• Токсоплазмоз.
• Фасциолез – в острой стадии болезни определяется наличие антител.
• Кожный или висцеральный лейшманиоз.

Итак, можно подытожить: сдать анализ ИФА на паразитов необходимо для выявления антигенов (продуктов жизнедеятельности паразитов и само их наличие), а также антител (иммуноглобулинов). Специфичность данного метода исследования при определении паразитов согласно статистическим данным составляет около 90%. Благодаря этому анализу врач может в точности установить вид паразитов, их общее количество, а также проследить динамику развития патологических процессов благодаря уровню антител.

Метод диагностики (ИФА) является информативным и не слишком затратным, поэтому многие лаборатории предлагают своим клиентам данный метод (иммуноферментного анализа крови). Исследование проводится натощак, кровь для анализа берут из локтевой вены пациента. Перед ИФА желательно не курить и не употреблять алкоголь.

Что такое анализ крови, проводимый методом ИФА

Среди методов анализа крови, позволяющих оценить способность организма противостоять инфекционным болезням и показывающих фазу болезни, важное место занимает иммуноферментный анализ (ИФА). Проведение этого исследования позволяет всесторонне оценить деятельность защитной функции крови и выявить состояние иммунодефицита при инфекционных патологиях, также заболеваниях крови, аутоиммунных процессах, гормональных проблемах.

Это лабораторное исследование, которое позволяет определять наличие специфических антител (защитных факторов крови белковой природы) к определенным антигенам (болезнетворным агентам). Среди антител первостепенное значение имеют иммуноглобулины, которые могут существовать в виде иммунокомплексов.

Иммуноглобулины вырабатываются вследствие сложных нейрогуморальных реакций иммунитета человека, возникающих как ответная реакция на внедрение чужеродных антигенов. На каждый вид болезнетворного агента вырабатываются свои специфические антитела. Действуют они путем «связывания» антигена или патологического микроорганизма, образую комплексное соединение «антиген-антитело» с последующей нейтрализацией, ферментативным лизисом, реакциями фагоцитоза и выводом из организма.Именно по наличию определенных комплексов методом ИФА определяется вид возбудителя или имеющегося у больного вредного вещества.

Стоит помнить, что после пройденного курса лечения антитела могут оставаться в нашем организме очень долго, даже после того, как инфекция покинула наше тело, т.е. остается, так называемый, «серологический шрам». Приведем пример: в ночном небе тысячи звезд. Многие из этих звезд уже давно погибли, но до нас до сих пор, веками, идет их свет. По сути, мы видим только след звезды. Свет есть, а звезды уже давно нет.

Но если света нет, это не говорит о том, что звезды там не было. То же самое и с антителами. Их наличие не гарантирует присутствия в организме искомого инфекционного агента. Отсутствие антител не говорит о том, что инфекции нет. Если результат анализа методом ИФА положительный, то это значит, что нужно искать инфекцию более специфическими и дорогостоящими методами - ПЦР, бактериологические посевы. Возможен ложноположительный результат в случае, если несколько микробов обладают схожей антигенной структурой, тогда к разным микробам будут вырабатываться «похожие» антитела.

Какие бывают иммуноглобулины

Открыто и изучено 5 основных классов иммуноглобулинов – IgА, IgM, IgG, IgD, IgE. роль остальных еще до конца не выяснена и она находятся в стадии научного исследования.

Основная задача иммуноглобулина А (IgA) заключается в защитных функциях слизистых оболочек дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта и мочевыделительной системы. При остром начале заболевания выявить их невозможно. Появляются эти защитные комплексы лишь со 2 недели начала заболевания, иногда позже. Основная масса иммуноглобулина А сосредоточена в слизистых тканях. Ориентировочно около 80%. Остальные антитела циркулируют в крови.

Основная функция – обезвреживание и уничтожение микроорганизмов. После стихания острых проявлений заболевания количество этих иммуноглобулинов начинает уменьшаться и полностью уходит на сроке до 8 недель после начала болезни. Если IgA обнаруживаются в более поздние сроки, то это свидетельствует о хронизации процесса.

Главными и первыми маркерами острой фазы развивающейся патологии являются иммуноглобулины класса М (IgM). Обнаруживаются они к 5 суткам начала недомогания. Определить их наличие в крови можно около 6 недель. Затем они начинают быстро исчезать.

Остаточный иммунный ответ характеризует наличие в крови иммуноглобулинов класса G (IgG). Появление этих факторов в крови обнаруживается примерно через месяц после начала болезни. В дальнейшем они могут определяться в течение многих месяцев, лет и даже всю жизнь, выполняя защитную функцию от возврата (рецидива) болезни, а в некоторых случаях делая невозможным вторичное развитие патологии.

Если же количество иммуноглобулина G начало вновь расти, то можно подозревать повторное заражение. Подобный вывод можно сделать путем проведения двух-трех проб, сделанных с промежутком в 2 недели.

Как проводится ИФА крови

Для иммуноферментного анализа в большинстве случаев используется кровь пациентов, иногда производят забор ткани стекловидного тела, жидкости спинномозгового канала, околоплодных вод.

Кровь набирают через инъекционную иглу в шприц из локтевой вены. Исследование проводят натощак. Следует помнить, что прием некоторых медицинских препаратов может влиять на результат анализа. Перед сдачей крови необходимо воздержаться от курения, приема алкоголя. Исказить результаты может прием наркотических веществ.

В случае отрицательных значений иммуноглобулинов IgM, IgG, IgA можно говорить об отсутствии заболевания или его начальной фазе, также результат с минусами возможен при полном выздоровлении по прошествии значительного количества времени.

Если IgA и IgM не обнаружены, а IgG проявляется положительно, то по всей вероятности речь идет о сформированном иммунитете после инфекционного заболевания, или после прививки.

Если IgA и IgM не обнаружены, а IgG проявляется положительно, то по всей вероятности речь идет о сформированном иммунитете после инфекционного заболевания, или после прививки

В случае высокого титра IgM при отрицательных значениях IgG, IgA можно делать вывод о наличии остро протекающего инфекционного заболевания.

Одновременные положительные значения результатов иммуноглобулинов – IgA, IgM, IgG характерны для острой фазы рецидива имеющегося хронического заболевания.

Что дает представленная технология: определение наличия гельминтов в крови; поиск других болезнетворных микроорганизмов в теле; можно узнать причины ухудшения вашего здоровья; лечение строится также на анализах, полученных таким способом; вы можете следить за состоянием своей иммунной системы.

Еще одна хорошая черта – возможность отслеживать онкологические маркеры вне зависимости от их происхождения, но при условии их присутствия в организме, разумеется. Данный тест пригоден и для описания состояния репродуктивной системы человека. Наличие определенных белков, гормонов и пептидов, позволяют судить о потенциале партнера в плане зачатия ребенка, а также предположительном качестве будущего плода.

Анализ крови на лямблии – довольно популярная практика у современных медиков. К тому же, данный метод исследования является прекрасным инструментом для биомедицинской аналитики и количественной статистики в плане специфичных антигенов.

Каким образом используется иммуноферментный анализ методом ИФА

Правда, это более сложные случаи, поэтому качество подобного анализа будет сильно зависеть от работников лаборатории, выполняющей тестирование. Особенности технологии и отличие ее от старых лабораторных исследований:

• теперь вместо пробы кала используется кровь, для определения наличия гельминтов;
• изучение пробы проводится в лаборатории очень быстро, уже на следующий день можно получить полную информацию;
• стоимость лабораторного исследования недорогое, так как теология очень проста;
• анализ крови на гельминтов дает высокие показатели точности.

Анализы при иммунологическом анализе крови методом ИФА

О том, какие бывают анализы крови с точки зрения иммунологической системы человека, мало кто знает, так эти анализы не так распространены. Как правило, такое исследование крови дает информацию о вирусе иммунодефицита в организме человека и является анонимной, так как проводится по желанию пациента.

Для забора используют взятую натощак из вены кровь, из которой для исследования методом центрифугирования получают сыворотку. Кроме этого, изучение сыворотки крови способно выявить ряд венерических заболеваний (сифилис, герпес, хламидиоз), а также все виды гепатита, корь, краснуху, паротит и токсоплазмоз.

В основном, для проведения ИФА анализа, исследуемым биологическим материалом является кровь, однако, исследованию может подвергаться спинномозговая жидкость, содержимое стекловидного тела, околоплодные воды и др.

Иммуноглобулины - это иммунные молекулы, способные связываться и нейтрализовать большинство инфекционных возбудителей и токсинов в организме. При этом важнейшей характеристикой иммуноглобулинов является их специфичность, то есть способность связываться с определенным антигеном. Именно это свойство используется для проведения анализа крови на иммуноглобулин.

Существует пять типов иммуноглобулинов, однако наиболее изученными являются иммуноглобулины А, М, и G. Иммуноглобулины М и G проявляют свою активность в крови. Иммуноглобулины А являются, своего рода, барьером на поверхности слизистых оболочек, так как присутствуют там в большом количестве.

Иммунологический анализ крови позволяет определять тип иммуноглобулинов, благодаря этому ИФА позволяет не только диагностировать заболевание, но и определить стадию данного и отслеживать динамику заболевания:

• в первые 2 недели заболевания обнаруживаются только иммуноглобулины А;
• со 2-й по 3-ю неделю заболевания в крови обнаруживаются иммуноглобулины А и М.;
• Сс3 по 4 неделю анализ крови на иммуноглобулин определяются все три типа;
• при выздоровлении в крови пропадают иммуноглобулины М, а количество А и G снижается в 2 – 4 раза;
• при наличии хронического процесса в крови обязательно присутствуют иммуноглобулины G, иммуноглобулины М отсутствуют, иммуноглобулины А могут как присутствовать, так и отсутствовать.

Область применения иммунологического анализа крови методом ИФА

• Диагностика вирусных заболеваний: гепатиты, герпес, Эпштейн-Барр вирус, цитомегаловирус и др;
• инфекции передающиеся половым путем: хламидиоз, гонорея, трихомонада, микоплазма, уреаплазма;
• сифилис; эндокринология (определение уровня гормонов);
• онкомаркеры (диагностика онкологических заболеваний); иммунология (диагностика иммунодефицита);
• аллергология (диагностика и лечение аллергий).

Серологический анализ крови - лабораторный метод исследования крови, который применяется с целью диагностики инфекционных заболеваний и определения стадии инфекционного процесса. Серологическая реакция основана на взаимодействии антител и антигенов.

Определение антигенов используют для определения родовой и видовой принадлежности микроорганизмов. Данный метод исследования применяется в урологии и венерологии. Кровь для серологического анализа крови берется утром натощак из вены.

Показания к назначению и выявляемые заболевания методом ИФА

Основной биоматериал для проведения ИФА - это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.

Для того чтобы избежать искажений в результатах, рекомендуется сдавать кровь натощак, а за две недели до исследования (если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний) необходимо отказаться от приема антибиотиков и противовирусных препаратов.Невозможно охватить полный список показаний к проведению ИФА.

Бесспорные преимущества ИФА - высокая чувствительность и специфичность метода. Чувствительность - это возможность распознать искомое вещество, даже если его концентрация в образце невысока. Специфичность же подразумевает безошибочность диагностики: если результат положительный, значит, найдены именно те антитело или антиген, которые предполагались, а не какие-то другие.

ИФА во многом заменил «золотой стандарт» микробиологии - бактериологический метод диагностики, в ходе которого для идентификации возбудителя требовалось выделить его из организма, а затем в течение нескольких дней выращивать культуру на питательной среде в пробирке.

Все то время, пока производился анализ, врачи были вынуждены лечить пациента «вслепую», догадываясь о происхождении микроорганизма по симптомам болезни. Определение IgM с помощью ИФА позволяет поставить точный диагноз уже в первые дни болезни.

Высокая степень технологичности проведения иммуноферментного анализа минимизирует влияние человеческого фактора, что снижает вероятность ошибки. Большинство используемых в современных лабораториях тест-систем и реактивов для ИФА выпускаются в промышленных условиях, что гарантирует точный результат.

Недостатки метода ИФА

К сожалению, для проведения ИФА нужно знать, что именно искать: методика анализа подразумевает, что врач заранее имеет предположение о природе заболевания. Поэтому нет смысла назначать такой тест в надежде случайно «угадать» диагноз.

В случае диагностики инфекционных заболеваний иммуноферментный анализ не может найти возбудителя и определить его специфичные свойства: он лишь указывает на наличие антител в крови у больного, косвенно свидетельствующих о присутствии чужеродного микроорганизма в теле человека. ИФА - крайне точный, но не дешевый метод, поэтому обращаться к нему нужно с умом, а интерпретацией результатов должен заниматься квалифицированный врач.

Возможные результаты ИФА

В зависимости от содержания анализа в бланке могут быть представлены данные в виде таблицы с перечислением всех антител или антигенов с пометками об отрицательной или положительной реакции, либо будет указано количественное значение результата (отрицательный, слабоположительный, положительный или резко положительный).

Последний вариант определяет, сколько антител содержится в анализируемом образце. Еще один количественный показатель - индекс авидности антител, выраженный в процентах. Он указывает, сколько времени прошло от начала инфекционного процесса (чем выше индекс - тем больше).

Сегодня выпускаются тысячи видов тест-систем ИФА, позволяющих обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях. Поэтому этот анализ используется практически во всех медицинских отраслях. Диагноз, поставленный с помощью ИФА, - это гарантия назначения адекватной терапии и эффективного лечения заболевания.

При наличии необходимых реактивов и хорошей организации работы лаборатории результат анализа вы получите в течение 1–2 суток после забора крови. В некоторых случаях, при необходимости получения экстренного ответа, этот срок может быть сокращен до 2–3 часов.

Содержание

Современная диагностика не обходится без лабораторных высокочувствительных анализов. Раньше для установления причины заболевания и обнаружения возбудителя инфекции врачи проводили разные микроскопические многоступенчатые исследования. Сегодня, чтобы опровергнуть или подтвердить первоначальный диагноз, надо сделать единственный тест – иммуноферментный анализ (ИФА). Данное лабораторное исследование помогает оценить состояние здоровья человека и диагностировать гематологические, онкологические, аутоиммунные, инфекционные патологии.

Что такое иммуноферментный анализ крови

Метод иммуноферментного анализа – это современное лабораторное исследование крови на присутствие в ней антигенов, антител к возбудителям и вирусам болезни. Метод ИФА помогает врачу выявлять этиологию заболевания, определять ее фазу, давность происхождения, уровень опасности для человека и вносить в лечение необходимые корректировки . Чаще других при иммуноферментном анализе исследуют наличие антител групп M и G. Что они из себя представляют?

При попадании патогенного микроорганизма в кровоток, иммунная система включает защитную реакцию в виде выделения антител (иммуноглобулинов). Эти вещества связываются с клеткой и выявляют, является ли она частью организма или пришла извне. Если система установила, что микроорганизм чужеродный, то число антител возрастает с целью борьбы с болезнетворным вирусом. Иммуноглобулины (Ig) бывают нескольких видов: одни появляются в период инфицирования, другие остаются на протяжении всей жизни, вырабатывая стойкий иммунитет. Антитела в медицине обозначаются: A, D, E, M, G.

Методом ИФА исследуют кровь, хотя существует и другие виды иммуноферментного анализа. Как правило, они различаются типом взятой жидкости, на основании которой далее проводится изучение состава и определение наличия антигенов. При этом для исследования берется как кровь человека, так и другие жидкости:

• содержимое стекловидного тела;
• слизь из цервикального канала и уретры;
• околоплодные воды;
• мазки;
• спинномозговая жидкость.

Показания к назначению

• аллергических реакций;
• иммунодефицита;
• недугов вирусного происхождения (гепатит, герпес, вирус Эпштейна-Барр, цитомегаловирус);
• венерических болезней, передающихся половым путем ЗППП (уреаплазма, сифилис, трихомонада, хламидиоз, микоплазма);
• болезней печени;
• нейросифилиса (инфекционное поражение ЦНС (центральной нервной системы)).

Анализ крови на ИФА часто проводится во время предоперационного комплексного обследования для определения уровня гормонов и оценки качества проводимого лечения. Высокая точность полученных данных помогает врачу иметь представление о развернутой картине состояния здоровья. При этом получение результатов происходит за короткий временной промежуток, что позволяет отслеживать динамику развития заболевания.

Преимущества метода

Бесспорными плюсами метода ИФА крови является высокая чувствительность, т.е. возможность определить искомое вещество, даже при малой его концентрации; и специфичность, подразумевающая безошибочность диагностики . Кроме того, исследование сыворотки крови методом ИФА имеет следующие преимущества:

Недостатки

Главным недостатком иммуноферментного анализа крови считается то, что при проведении исследования врач заранее должен иметь предположение о природе болезни. При диагностике инфекционных заболеваний нельзя случайно найти возбудителя и установить его иммуноферментные свойства. Тест лишь способен указать на наличие антител в крови пациента, косвенно свидетельствующих о присутствии вредоносного микроорганизма.

Кроме того, при нарушении техники выполнения или неправильной подготовке, анализ может показать ложноположительный или ложноотрицательный результат . Исследование сыворотки крови ИФА – точный, но при этом дорогой метод, поэтому к нему следует обращаться в крайних случаях. Интерпретацию результатов надо доверять лишь квалифицированному специалисту.

Подготовка

Иммуноферментный анализ необходимо проводить, придерживаясь рекомендаций врача, т.к. на результаты исследования часто влияют разные внешние факторы. Основные правила подготовки к ИФА:

• венозную кровь надо сдавать строго натощак (в норме, последний прием пищи должен быть за 12 часов до исследования);
• необходимо накануне проведения анализа исключить прием любых лекарственных препаратов (если пациент принимает антигистаминные (противоаллергические) средства, следует проконсультироваться с доктором о том, за сколько до начала ИФА надо их отменить);
• нельзя перед обследованием курить и пить алкогольные напитки, т.к. это негативно повлияет на результат;
• следует обязательно выспаться перед анализом;
• надо исключить любые физические нагрузки, стрессовые факторы;
• диагностика большинства гормонов женской репродуктивной системы потребует взятия крови в определенные дни менструального цикла.

Как проводится

Для проведения иммуноферментного анализа у пациента берется кровь из локтевой вены строго натощак. Больной заранее должен сообщить врачу о наличии болезней и принимаемых препаратах, чтобы результаты исследования не были искажены. Как правило, все лекарства надо прекратить пить за 16 дней до ИФА. Ощущения при проведении процедуры похожи на взятие крови во время биохимического анализа.

Материал отправляют в лабораторию, где из крови выделяют сыворотку, в которой находятся антитела. Полученный состав помещают в пробирку с антигенами. Это могут быть самые разные аллергены (молоко, шерсть, пыльца, цитрусовые), возбудители вирусных и инфекционных болезней и другие. После получения реакции все остатки сыворотки сливают. При помощи специальных индикаторов специалисты определяют количество антител. Срок выполнения ИФА зависит от лаборатории. Как правило, результаты исследования могут предоставить в срок от двух дней до недели .

Расшифровка ИФА

Иммуноферментный анализ крови помогает определить наличие в организме антител. Существуют несколько классов иммуноглобулинов:

1. IgM. Появляются самые первые после заражения. Наличие данных антител указывает на появление болезни в любом случае, т.к. у здорового человека этот класс отсутствует. Как правило, иммуноглобулины IgM присутствуют в крови примерно 6 недель.
2. IgA. Антитела содержатся в большом количестве в слизистых оболочках, защищая организм от проникновения патогенных микробов. Если у пациента присутствует данный класс, необходимо интенсивнее бороться с болезнью. Ведь иммуноглобулины А возникают лишь при хроническом заболевании. Исчезновение IgA свидетельствует об уничтожении инфекции.
3. IgG. Иммуноглобулины данного класса свидетельствуют о том, что человек либо является носителем инфекции, либо уже перенес заболевание. Данные антитела вырабатываются после IgM через месяц после заражения. Иммуноглобулины класса G могут присутствовать в организме на протяжении 5-6 лет, защищая его от рецидива заболевания, а при сифилисе такие антитела находятся пожизненно.

При проведении анализа ИФА в детском возрасте (до 1,5 лет) следует учитывать, что кровь ребенка содержит антитела IgG матери к инфекциям. Хотя это не означает, что малыш болен, скорее данный факт – норма. Наличие класса M свидетельствует о внутриутробной или приобретенной после рождения инфекции, т.к. антитела IgM матери не способны проникать в детский организм через плаценту. Расшифровка возможных комбинаций наличия или отсутствия антител 3 классов представлена в таблице:

Расшифровку результатов ИФА должен производить квалифицированный врач . Как правило, (+) говорит о положительном исходе анализа, а (-) – об отрицательном. Результат, который показывает отсутствие или наличие вещества, именуется качественным. Иногда его дополняет количественный, который отображает число различных веществ в организме. Часто тест-система имеет собственные референтные (соотносимые) значения. Превышение таких показателей означает наличие патологий у пациента.

Противопоказания

Кардинальных противопоказаний для проведения иммуноферментного исследования не выявлено. Иногда при беременности, когда у пациентки наблюдается непрерывное изменение гормонов в крови, может понадобиться неоднократное проведение анализа для более достоверного результата. Диагностический метод не рекомендуется использовать после:

• хирургических вмешательств;
• гемолиза (разрушения эритроцитов);
• переливания крови;
• взятия пункции или биопсии биологического материала.

Цена иммуноферментного анализа крови

Стоимость исследования ИФА зависит от политики медицинского учреждения, вида анализа и определяемого антигена, т.к. исходя из этих факторов, рассчитывается цена реагентных наборов и устанавливается сложность проведения исследования. Как правило, иммуноферментный анализ крови – это общедоступная процедура, средняя стоимость метода варьируется от 300 до 2000 рублей. Примерные цены на иммуноферментный анализ крови в Москве представлены в таблице:

Видео

ИФА или иммуноферментный анализ — современный способ определения многих патологий, в том числе инфекционного характера. Проводится исследование в лабораторных условиях. Основной задачей методики является выявление антител, их наличие указывает на проникновение в организм патогенных агентов. Современная медицина использует анализ ИФА для диагностики многих заболеваний и определения сторонних соединений.

Анализ ИФА: когда и как проводится

Методом ИФА специалистам удается выявить наличие специфических антител (иммуноглобулинов) в сыворотке крови и определить антигены. Иммуноглобулины вырабатываются вследствие сложных нейронных процессов, осуществляемых защитными функциями организма. Они являются естественной реакцией иммунитета на проникновение инородных агентов. На каждый тип патогенного микроорганизма вырабатываются специфические антитела.

Важно: по наличию определенных комплексов, методика иммуноферментного анализа позволяет выявить тип возбудителя в организме человека.

Диагностика посредством ИФА производится для обнаружения следующих заболеваний:

• герпеса;
• гепатита вирусного типа;
• вируса Эпштейна-Барра (герпеса 4 типа);
• цитомегоаловируса.

Исследование крови позволяет выявить основные болезнетворные бактерии, провоцирующие развитие сифилиса, уреаплазмоза и трихомоноза. Посредством анализа, специалисты определяют антитела к 600 видам аллергенов. Проведение иммуноферментного исследования уместно при подготовке к трансплантации органов.

Важно: в некоторых случаях, ИФА выступает дополнительной методикой определения онкологии в организме человека.

Анализ проводится исключительно в лабораторных условиях. Для исследования осуществляется забор венозной крови из локтевой вены. Результаты анализа будут доступны на следующие сутки. Для получения достоверной информации, специалисты рекомендуют соблюдать правила подготовки к ИФА:

• за сутки до исследования необходимо отказаться от употребления острой и копченой пищи;
• алкоголь находится под запретом;
• кровь сдается в утренние часы на голодный желудок;
• перед исследованием необходимо исключить любые физические и эмоциональные нагрузки;
• целесообразно отказаться от курения.

Какие патологии выявляет иммуноферментный анализ

Методом иммуноферментного анализа специалист определяет различные классы иммуноглобулинов, наличие которых указывает на развитие патологических процессов в организме. Так, основными показателями ИФА являются IgM и IgG. Наличие иммуноглобулина IgM указывает на развитие острого патологического процесса. Показатель IgG в крови характерен для стадии выздоровления.

Посредством анализа ИФА специалисты выявляют ряд опасных заболеваний. К их числу относят:

Важно: анализ ИФА назначается для подтверждения сифилиса при получении положительного результата путем сдачи крови на РВ.

Своевременная диагностика позволяет отследить эффективность проводимой терапии и в случае необходимости, провести ее корректировку.

Расшифровка анализа: положительный и отрицательный ответ

Расшифровка результатов ИФА осуществляется специалистом, на основании полученных данных. Ответ может быть как положительным, так и отрицательным.

Положительный ИФА

Результат считается положительным, если в ходе исследования в крови были обнаружены иммуноглобулины класса IgG и IgM. Наличие представленных компонентов указывает на развитие следующих заболеваний:

• сифилиса;
• гепатита вирусного типа;
• ЦМВИ (цитомегаловируса);
• герпеса;
• ветряной оспы;
• болезней, провокаторами которых выступают стафилококки и стрептококки;
• хламидиоза.

При развитии сифилиса, специфические антитела обнаруживаются в крови спустя 14 суток после заражения. По их количеству специалист определяет тяжесть течения болезни. Активная терапия сифилиса позволяет устранить все бактерии через 6 месяцев. Если лечение отсутствует, на полное восстановление организма уйдет не менее 1,5 лет.

Анализ ИФА выявляет гепатит вирусного типа еще в инкубационном периоде, до появления первых симптомов.

ЦМВИ является распространенной патологией, которая встречается у каждого третьего человека. Для населения она не несет опасности, инфицирование происходит в утробе матери.

В норме, антитела к герпетическому вирусу в организме человека отсутствуют. При их обнаружении принято диагностировать острую фазу заболевания.

При развитии ветряной оспы, в крови человека обнаруживаются специфические иммуноглобулины IgM. Они способны сохраняться в организме на протяжении 2-х лет, после полной ликвидации патологии.

Определить болезни, вызванные стрептококками и стафилококками, позволяет двукратная сдача анализа на ИФА. При повторном исследовании, уровень специфических антител стремительно возрастает.

На развитие хламидиоза указывает высокий уровень иммуноглобулина — 1:8 и выше. Показатель способен варьироваться в зависимости от прогрессирования болезни.

Внимание: для подтверждения развития определенного патологического процесса, специалист назначает дополнительные лабораторные и инструментальные исследования. Комплексное исследование позволяет назначить эффективную схему лечения.

Отрицательный ИФА

При отрицательном результате, в крови человека не обнаруживаются специфические иммуноглобулины класса IgM. Возможно наличие IgG, антитела способны сохранятся в организме после перенесенных заболеваний, бактериального и вирусного типа. В некоторых случаях, их наличие в сыворотке крови сохраняется на протяжении десятков лет.

Внимание: правильно расшифровать результаты анализа способен только опытный специалист.

Самостоятельное изучение ответов в большинстве случаев приводит к попыткам постановки диагноза и назначения некорректного лечения, без участия врача. Такое воздействие считается идеальным для дальнейшего прогрессирования патологического процесса.

В связи с развитием клеточных технологий, молекулярной биологии, генетики, физики, химии и ряда других высокотехнологичных дисциплин в повседневную практику внедряются новые высокоточные и высокотехнологичные методы. Данные междисциплинарные тенденции затрагивают и область медицинских знаний, и смежные области биологических, биохимических проблем. За последние десять лет получил широкое распространение и внедрение в массовую практику метод клинической лабораторной диагностики под названием иммуноферментный анализ.

Вообще технологии иммунологических ферментативных и радиологических реакций широко использовались в типировании клеток, культур клеток, различных тканей с начала 80-х годов XX столетия. Однако методы эти были очень трудоемкими, не унифицированными, не стандартизированными, что исключало их использование в лечебно-диагностических целях в массовом порядке. Такими методами пользовались лишь узкие, наукоемкие и высокоспециализированные лаборатории.

Однако с развитием техники, микротехники, производства различных биополимерных материалов стало возможным производить готовые наборы иммуноферментной диагностики, которыми смогут пользоваться лаборатории лечебно-профилактических учреждений широкого профиля. ИФА широко используется для диагностики всевозможных инфекций (хламидиоз , сифилис , цитомегаловирус , токсоплазмоз , герпес и т.д.), как острых, так и хронических, а также скрытых форм, которые протекают без клинических симптомов.Также этот метод применяют для контроля над хроническими заболеваниями. Давайте постараемся разобраться, что это за метод, и какие принципы лежат в его основе?

Компоненты иммуноферментного анализа – иммунная реакция и ферментативная реакция

Иммуноферментный анализ, как видно из названия, состоит из двух разных компонентов – иммунной реакции и ферментативной реакции. Иммунная реакция производит связывание биологических молекул, элементов клетки или микроорганизма, которые собственно и пытаются обнаружить, а ферментная реакция позволяет увидеть и измерить результат иммунологической реакции. То есть иммунная реакция – это часть комплексной методики, которая собственно обнаруживает искомый микроб. А ферментная реакция – это та часть комплексной методики, которая позволяет перевести результат иммунной реакции в форму, видимую глазом, и доступную для измерения рутинными химическими методиками. Исходя из такой структуры метода иммуноферментного анализа, разберем обе его части по отдельности.

Иммунная реакция, что это? Что такое антитело, антиген?

Что такое иммунная реакция? Что такое антиген?
В первую очередь разберем, что такое иммунные реакции. Иммунные реакции – это специфические реакции связывания антигена с антителом с образованием иммунного комплекса. Что это значит? На поверхности каждой клетки любого организма имеются особые структуры, которые называются антигены . Антигены в целом – это молекулы, которые несут информацию о клетке (подобно информации на бейдже у человека, где указываются основные данные этого человека).

Индивидуальные и видовые антигены – что это? Зачем нужны эти антигены?

Имеются антигены индивидуальные , то есть присущие только данному конкретному организму. Эти индивидуальные антигены разные у всех людей, есть похожие друг на друга, но все равно отличающиеся. Двух одинаковых копий индивидуальных антигенов в природе не существует!

Второй основной тип антигенов – это видовые антигены , то есть присущие какому-либо конкретному виду живых существ. Например, у человека присутствует свой видовой антиген, общий для всех людей, у мышей имеется свой мышиный видовой антиген и т.д. На поверхности каждой клетки обязательно присутствуют видовой и индивидуальный антиген.

Видовой антиген используют клетки иммунной системы для опознавания «свой – чужой».

Как происходит узнавание антигена?

Иммунная клетка связывается с подозрительной клеткой и проводит опознание именно по индивидуальному антигену. В памяти иммунной клетки «записано» как выглядит «свой антиген». Таким образом, если антиген подозрительной клетки совпадает с описанием «свой антиген», значит, эта клетка собственного организма и опасности не представляет. Тогда иммунная клетка «отвязывается» и уходит. А если антиген не совпадает с описанием «свой», тогда иммунная клетка идентифицирует эту клетку как «чужой», а значит потенциально опасный для всего организма. В этом случае иммунная клетка не «отвязывается», а начинает уничтожать опасный объект. Точность такого иммунологического узнавания поражает воображение – 99,97%. Ошибок практически не бывает!

Что такое антитело, иммунный комплекс?
А что представляет собой антитело?

Антитело – это особая молекула, расположенная на поверхности иммунной клетки. Именно антитело и связывается с антигенами подозрительной клетки. Далее антитело передает информацию внутрь клетки, где происходит опознавание, и получает обратный сигнал двух видов «свой» или «чужой». При сигнале «свой» антитело разрушает связь с антигеном и отпускает клетку.

Что такое иммунный комплекс?
При сигнале «чужой» ситуация разворачивается иначе. Антитело не разрывает связь с антигеном, а наоборот, посылая специфические сигналы, вызывает «подкрепление». Биологически это означает, что другие антитела, находящиеся в другой части клетки, начинают перемещаться к участку, откуда идет сигнал опасности, и также образуют связь между собой и пойманным антигеном. В конце концов, антиген оказывается, окружен со всех сторон и прочно привязан.Такой комплекс антиген + антитело называется иммунный комплекс . С этого момента начинается утилизация антигена. Но сейчас подробности процесса нейтрализации антигена нас не интересуют.

Виды антител (IgA , IgM , IgG , IgD , IgE )
Антитела – это белковые структуры, которые, соответственно, имеют химическое название, которое и используется как синоним слова антитела. Итак, антитела = иммуноглобулины .

Существуют 5 типов иммуноглобулинов (Ig) , которые связываются с разными видами антигенов в разных местах человеческого организма (например, на коже, на слизистых, в крови и т. д.). То есть антитела имеют разделение труда. Эти иммуноглобулины называются буквами латинского алфавита – A, M, G, D, E и обозначаются следующим образом – IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

В диагностике используют только один вид антител, который наиболее специфичен в отношении определяемого микроба. То есть связывание данного вида антител с определяемым антигеном происходит всегда. Чаще всего применяются IgG и IgM.

Именно этот принцип иммунной реакции (уникальная точность и специфичность узнавания определяемого биологического объекта) лежит в основе иммуноферментного анализа.В силу высокой точности антител в узнавании антигенов, точность всего метода иммуноферментного анализа оказывается также высочайшей.

Ферментативная реакция

Какая реакция – ферментативная? Что такое сродство, субстрат и продукт реакции?
Перейдем к рассмотрению ферментативной реакции в работе метода иммуноферментного анализа.

Что такое ферментативная реакция?

Ферментативная реакция – это химическая реакция, при которой одно вещество под действием фермента превращается в другое. Вещество, на которое действует фермент,называется субстратом . А вещество, которое получается в результате воздействия фермента, называется продуктом реакции . Причем особенность ферментативной реакции такова, что определенный фермент действует только на определенный субстрат. Такое свойство фермента узнавать «свой» субстрат называется сродством .

Таким образом, каждый фермент проводит только одну, специфичную для него реакцию. Ферментов в биологическом мире известно великое множество, равно как и ферментативных реакций. В иммуноферментной диагностике используется лишь несколько ферментативных реакций – не более 10.При этом выбирали такие ферментативные реакции, продуктом которых являются окрашенные вещества. Почему же продукты ферментативной реакции должны быть окрашенными? Потому что для вычисления концентрации вещества по окрашенному раствору существует простой химический метод – колориметрия .

Метод колориметрии – суть и принцип

Колориметрия применяет измерение плотности окраски раствора, а по плотности окраски вычисляют концентрацию вещества.При этом специальный прибор – колориметр измеряет плотность окраски раствора. В колориметрии возможны два варианта зависимости плотности окраски от концентрации вещества – это прямо пропорциональная зависимость или обратно пропорциональная зависимость. При прямо пропорциональной зависимости, чем выше концентрация вещества, тем интенсивнее плотность окраски раствора. При обратно пропорциональной зависимости, чем выше концентрация вещества, тем ниже плотность окраски раствора. Технически это происходит так: берется несколько растворов с известной концентрацией вещества, измеряется плотность этих растворов, строится график зависимости концентрации от плотности окраски (калибровочный график ).

Далее измеряют плотность окраски раствора, концентрацию которого выясняют, и по калибровочному графику находят значение концентрации, соответствующее уровню измеренной плотности окраски раствора.В современных автоматических колориметрах только один раз проводят калибровку, далее аппарат сам строит калибровочную кривую, которая остается в памяти прибора, и измерение происходит автоматически.

В иммуноферментном анализе чаще всего применяются следующие ферменты: пероксидаза, щелочная фосфатаза , авидин.

Как же совмещаются иммунологическая и ферментативная реакция в иммуноферментном анализе? Сейчас мы перейдем к рассмотрению собственно иммуноферментного анализа. Какие этапы он включает и что происходит при протекании этих реакций? Иммуноферментный анализ бывает прямой и непрямой .

Прямой иммуноферментный анализ – этапы проведения

В прямом иммуноферментном анализе используют антитела к выявляемому антигену, соединенные со специфической меткой. Эта специфическая метка и есть субстрат ферментативной реакции.

Прикрепление антигенов к поверхности лунки и соединение антигена с антителом

Как проходит прямой иммуноферментный анализ? Берется биологический материал (кровь, соскобы со слизистых, мазки) и помещается в специальные лунки. Биологический материал оставляют в лунках на 15-30 минут, чтобы антигены могли приклеиться к поверхности лунок. Далее в эти лунки добавляют антитела к выявляемому антигену. Это значит, что выявляя антигены, например, сифилиса, добавляются антитела против антигенов сифилиса. Эти антитела получают промышленным способом, а лаборатории покупают уже готовые наборы.Данную смесь исследуемого материала и антител оставляют на некоторое время (от 30 минут до 4-5 часов), чтобы антитела смогли найти и связаться со «своим» антигеном.Чем больше в биологической пробе антигенов, тем больше антител свяжется с ними.

Удаление «лишних» антител

Как было указано, антитела к тому же связаны со специфической меткой.Поскольку антитела добавляются в избытке, то не все они свяжутся с антигенами, а если антигена вообще нет в пробе, то, соответственно, ни одно антитело не свяжется с искомым антигеном. Для того чтобы убрать «лишние» антитела, содержимое из лунок просто выливают. В результате этого все «лишние» антитела убираются, а остаются те, которые связались с антигенами, поскольку антигены «приклеены» к поверхности лунок. Лунки несколько раз ополаскивают специальным раствором, который позволяет вымыть все «лишние» антитела.

Далее начинается второй этап – ферментативная реакция. В промытые лунки добавляют раствор с ферментом и оставляют на 30-60 минут. Данный фермент имеет сродство к веществу (специфической метке), с которым связаны антитела. Фермент проводит реакцию, в результате которой эта специфическая метка (субстрат) превращается в окрашенное вещество (продукт). Затем методом колориметрии находят концентрацию этого окрашенного вещества. Поскольку данная специфическая метка связана с антителами, значит, концентрация окрашенного продукта реакции равна концентрации антител. А концентрация антител равна концентрации антигенов. Таким образом, в результате проведенного анализа мы получаем ответ, какова концентрация выявляемого микроба или гормона.

Именно так проходит прямой иммуноферментный анализ. Однако сегодня чаще используют непрямой иммуноферментный анализ, поскольку чувствительность и точность непрямого выше, чем прямого. Итак, перейдем к непрямому иммуноферментному анализу.

Непрямой иммуноферментный анализ – этапы проведения

В непрямом иммуноферментном анализе два этапа. При проведении первого этапа используют немеченые антитела к выявляемым антигенам, а во втором этапе применяют меченые антитела к первым немеченым антителам. То есть получается не прямое связывание антитела с антигеном, а двойной контроль: связывание антител с антигеном, после чего связывание вторых антител с комплексом антитело + антиген. Как правило, антитела для первого этапа – мышиные, а для второго – козьи.

Фиксация антигенов на поверхности лунки и связывание антигена с немеченым антителом
Так же как и для прямого иммуноферментного анализа производится забор биологического материала – кровь, соскобы, мазки. Исследуемый биологический материал вносят в лунки и оставляют на 15-30 минут для приклеивания антигенов к поверхности лунок. Затем в лунки вносят немеченые антитела к антигенам и оставляют на промежуток времени (1-5 часов), чтобы антитела связались со «своими» антигенами и образовали иммунный комплекс (первый этап ). После чего удаляют «лишние», не связавшиеся антитела, путем выливания содержимого лунок. Производят промывку специальным раствором для полного удаления всех не связавшихся антител.

Связывание меченого антитела с комплексом антиген + немеченое антитело
После чего берут вторые антитела – меченые, добавляют в лунки и опять оставляют на некоторое время – 15-30 минут (второй этап ). За это время меченые антитела связываются с первыми – не мечеными и образуют комплекс – антитело + антитело + антиген. Однако и меченые, и не меченые антитела вносятся в лунки в избытке. Поэтому нужно опять удалить «лишние», уже меченые антитела, которые не связались с немечеными антителами. Для этого повторяют процедуру выливания содержимого лунок и промывки специальным раствором.

Ферментативная реакция – образование окрашенного соединения
После чего вносят фермент, осуществляющий реакцию превращения «метки» в окрашенное вещество. Окраска развивается в течение 5-30 минут. Затем проводят колориметрию и вычисляют концентрацию окрашенного вещества. Поскольку концентрация окрашенного вещества равна концентрации меченых антител, а концентрация меченых равна концентрации немеченых антител, которая, в свою очередь равна концентрации антигена. Таким образом, получаем концентрацию выявляемого антигена.
Такой двойной контроль в виде использования двух видов антител позволил повысить чувствительность и специфичность метода иммуноферментного анализа. Несмотря на удлинение времени проведения анализа и включение дополнительных этапов, эти потери компенсируются точностью результата. Именно поэтому в настоящее время подавляющее большинство методик иммуноферментного анализа – это непрямой иммуноферментный анализ.

Какие заболевания выявляют методом иммуноферментной диагностики?

Перейдем к рассмотрению того, какие заболевания и какие биологически активные вещества выявляются методом иммуноферментного анализа. Вещества, выявляемые методом иммуноферментного анализа, представлены в таблице.

Гормоны и маркеры заболеваний щитовидной железы	Тиреопероксидаза (ТПО)
	Тиреоглобулин (ТГ)
	Тиреотропный гормон (ТТГ)
	Тироксин (Т4)
	Трийодтиронин (Т3)
	Свободный тироксин (Т4)
	Свободный трийодтиронин (Т3)
Диагностика репродуктивной функции	Лютеинизирующий гормон (ЛГ)
	Фолликулостимулирующий гормон (ФСГ)
	Пролактин
	Прогестерон
	Эстрадиол
	Тестостерон
	Кортизол
	Стероид связывающий глобулин (ССГ)
	Альфафетопротеин (АФП)
Онкомаркеры	Хорионический гонадотропин (ХГ)
	Простатспецифический антиген (ПСА)
	СА – 125
	СА – 19.9
	CYFRA – 21-1
	М – 12 (СА – 15.3)
	MUC – 1 (M – 22)
	MUC1 (M – 20)
	Альвеомуцин
	К – цепь
	L – цепь
	Фактор некроза опухолей (ФНОα)
	γ – интерферон
	Раково-эмбриональный антиген (РЭА)
Диагностика инфекционных заболеваний